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Tissuelyser-48擬南芥或水稻穗RNA快速提取步驟兩種方法

更新時間:2012-10-11   更新時間:2012-10-11   點擊次數(shù):3009次

*種 濕磨法

1.取打碎機適配器于-80°冷凍約15min。
2.取一指節(jié)長度的花序,好帶上一片葉子,(材料量可多可少,7d大小的苗地上部分也能提出RNA),放入國產(chǎn)2ml EP管中, 加一粒鋼珠,液氮速凍。之后用鑷子取出,快速加入適配器中。(好用國產(chǎn)的EP管即可,進口的管子液氮凍過后,容易裂)
3.打碎15s,50HZ。(水稻嫩葉為。45S,60HZ 老葉為,70S 60HZ)
4.將材料再次放入液氮中。
5.用磁鐵吸出鋼珠,加入1ml Trizol,余下步驟即正常的RNA提取步驟。

第二種 干磨法

1.取一指節(jié)長度的花序(材料量可多可少,7d大小的苗地上部分也能提出RNA),放入國產(chǎn)2ml EP管中,加一粒鋼珠,400ul Trizol。
2.打碎1min 50HZ (水稻嫩葉為。45S,60HZ 老葉為,70S 60HZ) 。
3.吸出鋼珠,補600ul Trizol。
4.余下步驟即正常的RNA提取步驟。
注意:鋼珠遇到Trizol 會被溶解一部分,所以之后的提取液是黃色的(有鐵離子),不必在意,之后異丙醇那一步鐵離子會和上清一起別棄掉。

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